MS배지 만들기, 고체 MS배지 만드는 과정 및 준비물 고구마 치상 실험용 배지 & 피펫 팁 사용법

대학교에서 실습한 MS배지 만드는 과정과

MS배지 준비물에 대해서 알아보겠습니다.

이번 실습에는 고체형 MS배지를 만드는 과정을

적어보겠습니다.

 

관심있으시는 모든 학생분들에게 도움이 되었으면 좋겠습니다.

 

여기서 잠깐 MS배지가 무엇인가? <간단하게>

1962년 Murashige와 Skoog가

담배 조직배양을 위해 개발한 배지로써,

무기물 배지에 옥신과 사이토키닌을 첨가한 

고체상태와 액체상태 배지가 있습니다.

MS배지 준비물 입니다.

정확하게 적어보고 싶어서 실험에 사용된 모든 준비물을

사진을 찍어 올려보았습니다.

스푼	재료의 조제에 사용됩니다. 이삭과 절단은 메스입니다.
마그네틱 바, 거름종이	마그네틱 바 : 비커에서 배지를 혼합용도 거름종이 : 시약을 저울에 측정할 때 사용
페트리 디쉬	배지를 분주할 때 사용
비커	배지 조성을 위해 담는 용도
유리병	비커에 있는 배지를 옮겨 담아 오토클래브에 돌리기 위한 용기
메스실린더	정확한 배지의 정량을 맞추기 위함
식물 생장조절제	호르몬 (BA, 2,4-D)
오토클래브 테이프	멸균이 잘 되었는지 확인하는 용도

 

HCl, NaOH	pH조절하는 용도 주사기를 이용하여 양 조절
슈크로스	양분 역할
Plant AGAR	배지를 고체로 만들기 위함
MS medium 파우더	양분 역할
클린벤치(생물 안전 작업대)	배지의 분주가 이루어지는 곳 시작 전 15분 동안 자외선 살균
피펫	호르몬 첨가시 정확한 양 조절
피펫 팁	피펫 끝에 부착하여 사용
pH농도 측정기	pH농도를 측정하는데 사용
증류수
오토클래브 = 고압고온멸균기	1.2기압 121℃ 20분 고압고온멸균

500ml 비커에 증류수 300ml 정도 넣은 후

마그네틱 바를 넣고 자석교반기에 돌려줍니다.

그러면 마그네틱 바가 소용돌이를 일으키며 돌아갑니다.
(500ml를 넣지 않은 이유는 BA, 2,4-D, 슈크로스를 넣은 후 정량하기 때문.)

 

500ml기준 슈크로스 15g과 MS medium 파우더 2.2g를 첨가해 줍니다.

슈크로스는 많이 들어가기 때문에
시약그릇을 사용하고 올려둔 뒤에 전자저울에 용기버튼을 누르면 0으로 맞춰줍니다.

MS medium 파우더도 마찬가지로 전자저울 위에

거름종이를 올린 후 용기 버튼을 눌러준 다음에
2.2g을 첨가합니다.

자석 교반기에 올린 상태로 첨가해 줍니다.

 

<첨가 시 단위 주의>
(MS 파우더는 1L 기준 4414.09mg입니다. 그래서 500ml기준 2.2g을 넣어줍니다.)

슈크로스, MS medium 파우더가 녹을 때 까지 기다린 후 500ml로 정량합니다.
제조 조건은 BA 0.5mg/L, 2,4-D 0mg/L이기 때문에 BA만 넣어줍니다.

100ml ; 50mg = Xml ; 0.5mg/L (500ml 로 만들기 때문에 절반!!)
따라서 X = 0.5ml = 500ul를 넣어줍니다.

 

실험실에는 용량에 따라 다양한 피펫이 있습니다.
500ul를 넣어주어야 하므로 100~1000ul 피펫으로 넣어줍니다.

가운데 눈금에 100이라고 적혀있습니다. 이것은 100ul이 아니라 1000ul입니다.
500ul를 넣어주어야 하므로 50으로 맞추어 주고 피펫을 사용합니다.
피펫을 눌러보면 어느 시점에 걸리는 부분이 있는데 힘을 주면 더 눌러집니다.
더 눌러서 사용하지 말고 힘주기 전 부분에서 가볍게 눌러서 빨아들이면 500ul가 팁에 들어옵니다.
팁은 같은 색깔의 팁을 끼워주면 됩니다.

실험실에는 용량에 따라 다양한 피펫이 있습니다.
500ul를 넣어주어야 하므로
100~1000ul 피펫으로 넣어줍니다.

 

<500ml 맞추기>
식물 생장조절제까지 넣어준 후에 1L 메스실린더에

증류수를 500ml 정말 덜되게 넣어주어 평평한 곳에

수평을 맞추어 증류수를 조금씩 넣어
500ml를 맞춥니다.

 

pH 농도는 pH측정기를 이용하여 용액의 pH농도를 5.8을 맞춰주어야 하는데
HCl은 pH를 낮추어주고 NaOH는 높여줍니다.

 

1) 파란색 마개를 열어주고 밑의 통을 제거한 후 입구를 증류수로 세척합니다.
2) 교반기에 돌리면서 pH농도 측정기를 비커에 넣어줍니다.
3) 측정기에 READY가 나올 때 까지 기다리고 농도를 측정합니다.
4) 측정된 농도에 따라 pH농도가 5.8보다 높으면 HCl로 낮춰주고 낮으면
     NaOH 를 분주용 주사기를 이용해 5.8로 맞추어 줍니다.
     (한 방울씩 넣어주어야 합니다.)

Plant agar 4g을 첨가한 후에 자석교반기를 이용하여

완전히 녹아준 후에 마그네틱바와 함께 시약병에 넣어줍니다.

 

<Plant agar를 넣는 이유>
 고체 배지를 만들기 위해서 Plant agar를 넣어줍니다.

<마그네틱 바를 넣는 이유>
고압고온멸균이 끝난 후에 교반기에 돌린 후에 페트리디쉬에

분주해야 하므로 마그네틱 바를 함께 넣어줍니다.

 

 

시약병 뚜껑을 호일로 감싼 다음 auto clave 테이프를 붙이고

시약병에 마킹테이프를 붙여서 날짜와 조 그리고 식물생장조절 = 호르몬을 적고
고압고온멸균기에 1.2기압 상태에서 121℃ 15~ 20분 멸군시켜줍니다.

고압멸균기가 80℃ 이하로 내려간 다음 꺼내주고 교반기에 돌린 후

클린벤치에 들어가 손 포함 모든 곳들을 알코올 소독을 해준 후에 클린벤치로 들어가줍니다.

분주한 MS배지를 클린벤치 내에서 식혀 액체상태인 배지가 고체상태로 굳을 때 까지 보관합니다.

MS 마킹테이프를 시약병에서 떼어내어 분주한 배지 앞에 붙여 보관합니다.

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