고구마 끝순 채취와 고구마 생장점 배양과 치상 준비물 및 방법

대학교에서 실습한 고구마 끝순 채취와

고구마 생장점 배양과 치상 준비물 및 방법에 대해

알아보겠습니다.

 

관심있으시는 모든 학생분들에게 도움이 되었으면 좋겠습니다.

고구마 생장점 배양 준비물입니다.

정확하게  적어보고 싶어서 실험에 사용된 모든 준비물을

사진을 찍어 올려보았습니다.

메스 제거제, 스푼, 메스대, 핀셋, 메스날(2개)	재료의 조제나 이식과 절단에 사용
필터 페이퍼, 페트리디쉬	필터 페이퍼 : 소독한 끝순 보관하는데 사용 페트리디쉬 : 생장점 채취할 때 사용
멸균수	증류수를 오토클래브로 멸균한 것으로 끝순 세척에 사용
팔콘 튜브	채취한 끝순을 세척하는 데 사용
파라필름, MS배지	파라필름 : 배양용기를 밀봉할 때 사용 MS배지 : 생장점 치상하는 데 사용
오토클래브로 멸균한 유리병과 체	끝순 소독에 사용
락스(NaClO) 2%	끝순 소독용 용액 (NaClO = 차아염소산나트륨)
tween 20(계면활성제) EX) 퐁퐁	칼 끝에 소량만 묻혀서 락스로 소독할 때 같이 사용, 끝순에 있는 털 제거용

 

현미경	끝순에서 생장점을 채취할 때 사용
클린벤치(생물 안전 작업대)	생장점 채취가 이루어지는 곳 시작 전 15분 동안 자외선 살균
알코올램프, 튜브랙	핀셋, 메스 등 철제, 유리 기구를 화염소독하고 보관하는 용도
알콜 70%	클린벤치로 들어가기 전 손 소독용

 

농가에서 채취한 고구마 끝순을 메스를 이용해 엽을 최대한 잘라준 뒤
생장점을 감싸고있는 엽원기 2~3개 정도를 남기고 현미경으로 관찰하기 위해

핀셋으로 잡을 수 있는 부분만을 남겨두고 잘라줍니다.

 

1번부터 5번 순서대로 엽을 잘라줍니다.

팔콘 튜브에 담아둔 끝순을 알코올 70%를 넣어 30초를 흔들어서

끝순만 남겨두고 알코올만 부어줍니다. 그 다음 락스 2%를 팔콘 튜브에 절반 부어줍니다.

 

끝순 채취하는데 사용했던 메스 끝부분을 트윈 20에 찍어
팔콘 튜브에 넣어준 다음 10분 동안 흔들어 줍니다.

손을 소독한 후에 클린 벤치 안에 있는 알코올램프에 불을 붙이고

핀셋과 스푼을 소독해주고 오토클래브로 멸균한 유리병과 체도 화염소독 해줍니다.
화염소독 해준 유리병위에 체를 올려두고 10분 동안 흔들어준 팔콘튜브를 부어줍니다.
부어줄 때 팔콘튜브 안쪽에 끝순이 전부 다 나오게 부어줍니다.

 

부어준 끝순과 거품이 같이 나와서 멸균수를 높은곳에서 조금씩 부어서 거품기를 제거해 줍니다.

그리고 화염소독한 스푼으로 클린 벤치 안에 있는 새로운 팔콘튜브안에 끝순을 담아줍니다. 

 

 

끝순을 담은 팔콘튜브에 남아있는 거품기를 제거하기 위해서

팔콘튜브의 절반(50ml)정도를 넣어준 다음

2분씩 3번 반복하여 거품기를 제거해 줍니다.

각 과정 마다 스푼, 핀셋, 체, 팔콘튜브 뚜껑등을 화염소독 해줍니다.
2분씩 흔들고 체에 부어줄 때 팔콘튜브를 손가락으로 톡톡 치면

떠있는 끝순들이 아래로 가라앉아 쉽게 멸균수만 부어줄 수 있습니다.

부어줄 때 혹시나 뚜껑에 끝순이 붙어있는지도 확인을 해줍니다.

마지막 행굼이 끝난 후 체에 거른 후에 오토클래브로 처리하고

화염소독까지 한 여과지를 페트리디쉬에 깔아서
그 위에 끝순을 올려둡니다.

올려둔 끝순을 화염소독한 핀셋으로 집어

현미경으로 생장점 채취를 시작합니다.

화염소독한 스푼으로 한방에 툭 하고 끝순을 놓습니다.
화염소독한 핀셋으로 끝순의 대를 잡고있는 모습입니다.

하얀 코코넛 과실처럼 하얗게 나와있지만

아직 미숙한 엽원기도 투명한 색깔이기 때문에 헷갈릴 수도 있습니다.

 

채취한 생장점을 배지위에 긁듯이 말고 살포시 올려두고

파라필름을 붙여둔 뒤에 조직배양실에 배치시킨 후
혹시나 화염소독과 손에 알코올을 잘 뭍혔지만

감염이 되었을 수도 있기 때문에 관찰을 해줍니다.

 

왼쪽 갈색이 보이는 사진이

소독을 잘 하였지만 감염된 생장점과 배지의 모습입니다.

생장점 주위에 곰팡이가 피어난 것을 확인 할 수 있습니다.

 

오른쪽 사진을 보시면

점처럼 작은 생장점이 감염 없이 잘 자라면

초록색으로 자라기 시작합니다.

시간이 지남에 따라 작은 초록 생장점이 하나의 작물로 성장합니다.

 

전문가가 아닌 대학생의 눈으로 실험한

고구마 끝순 채취와 고구마 생장점 배양과 치상 준비물 및 방법입니다.

미숙하지만 도움이 되셨으면 좋겠습니다. 감사합니다.

 

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