B5배지, B-5배지 만들기 식물조직배양에 가장 많이 사용하는 배지 만드는 과정 및 준비물

대학교에서 실습한 B5배지 만드는 과정과

B5배지 준비물에 대해서 알아보겠습니다.

 

관심있으시는 모든 학생분들에게 도움이 되었으면 좋겠습니다.

 

여기서 잠깐 B5배지가 무엇인가?<간단하게>

1968년 O. L. Gamborg, R. A. Miller 그리고 K. Ojima가

콩의 뿌리 세포 현탁배양을 위해 개발한

배지입니다.

B5배지는 MS배지와 함께

식물조직배양에 가장 많이 사용되는 배지로

고체 및 액체의 형태로 다양하게 사용되고 있습니다.

 

B5배지 준비물 입니다.

정확하게 적어보고 싶어서 실험에 사용된 모든 준비물을

사진을 찍어 올려보았습니다.

B5배지에는 멤브레인 여과기는 사용하지 않습니다(실수)

스푼	배지 조성을 위한 용도
마그네틱 바, 거름종이	마그네틱 바 : 비커에서 배지를 혼합용도 거름종이 : 시약을 저울에 측정할 때 사용
페트리 디쉬	배지를 분주할 때 사용
비커	배지 조성을 위해 담는 용도
유리병	비커에 있는 배지를 옮겨 담아 오토클래브에 돌리기 위한 용기
메스실린더	정확한 배지의 정량을 맞추기 위함
오토클래브 테이프	멸균이 잘 되었는지 확인하는 용도

 

B-5 salt	B5배지의 주 성분
HCl, NaOH	pH조절하는 용도 주사기를 이용하여 양 조절
클린벤치(생물 안전 작업대)	배지의 분주가 이루어지는 곳
슈크로스	양분 역할
pH농도 측정기	pH농도를 측정하는데 사용
오토클래브 = 고압고온멸균기	1.2기압 121℃ 20분 고압고온멸균

B5배지는 NLN배지와 같은 방식으로

액체배지를 만든 후 시약병에 넣은 후 고압고온멸균기를 이용하여
멸균합니다. (1.2기압 121℃ 20분 고압고온멸균)

자석 교반기로 다 녹인 용액을 메스실린더에 넣어 500ml를 채워야 하므로

증류수를 더욱 추가시켜 500ml를 채워줍니다.500ml를 채우고

자석교반기에 다시 돌려 pH농도 측정기로 농도 6.0을 맞추어 줍니다.

 

다 맞춘 용액은 시약병에 옮겨서 뚜껑에 호일을 덮고

오토클래브 테이프를 붙여줍니다.
(1.2기압 121℃ 20분 고압고온멸균)

 

<pH농도 측정기 사용법>

1) 파란색 마개를 열어주고 밑의 통을 제거한 후 입구를 증류수로 세척합니다.
2) 교반기에 돌리면서 pH농도 측정기를 비커에 넣어줍니다.
3) 측정기에 READY가 나올 때 까지 기다리고 농도를 측정합니다.
4) 측정된 농도에 따라 pH농도가 5.8보다 높으면 HCl로 낮춰주고 낮으면
NaOH 를 분주용 주사기를 이용해 5.8로 맞추어 줍니다.
(한 방울씩 넣어주어야 합니다.)

+

한방울 넣어주고 농도가 변하지 않을 때 까지 기다린 후

다시 한방울 넣어줍니다(5.8이 될때까지)

 

멸균을 다 마친 B-5배지에 각각 날짜와 조를 적어줍니다.
B-5배지는 추후에 약배양에 사용됩니다.

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