딸기 소포자 배양, 소포자 배양 준비물 설향 소포자 배양 NLN배지 B5배지 사용 및 과정

대학교에서 실습한 딸기 소포자 배양 과정과

딸기 소포자 배양 준비물에 대해서 알아보겠습니다.

 

관심있으시는 모든 학생분들에게 도움이 되었으면 좋겠습니다.

핀셋, 메스, 메스대	딸기 소포자 배양을 위한 도구
멸균시킨 막자사발 유리병, 45um 체	꼭 멸균시킨것을 사용
페트리 디쉬	소포자배양 분주할 때 사용
팔콘튜브	딸기 화뢰를 세척할 용도
피펫 에이드	소포자 배양시 사용
피펫 팁	피펫 에이드에 장착
막자사발	딸기 화뢰를 가는 용도
45um 체	간 화뢰를 걸러내는 용도
저울	소포자 배양 무게를 동일시 위함

원심분리기	물질을 분리, 정제, 농축하는 기계
클린벤치(생물 안전 작업대)	(소포자 배양과 약배양 장소) (시작 전 15분 동안 자외선 살균)
B-5 배지	(이번 시험에서는 세척용)
NLN배지	(소포자 배양용)

개화가 시작된 꽃봉오리를 채취하여 화뢰의 화탁 부분을 조금 잘라줍니다.

그리고 팔콘튜브에 락스1% 를 넣고 15분동안 세척해 줍니다.

팔콘튜브를 바꿔주지 않고 멸균수를 넣어 3분동안 3번 세척해 줍니다.

멸균된 상태로 호일로 쌓여져 있는 막자사발을 꺼내어

손잡이 부분은 화염소독 까지 해주고 딸기 화뢰를 넣고 갈아줍니다.

저번 시간에 만들었던 B-5 배지를 조금씩 넣어주어 부드럽게 갈아줍니다.

B5배지, B-5배지 만들기 식물조직배양에 가장 많이 사용하는 배지 만드는 과정 및 준비물

손잡이 아랫부분에 손이 닿지 않게 오염되지 않게 부드럽게 갈아줍니다.

부드럽게 갈린 화뢰를 조금씩 따라주지 말고 바로 45um체에 걸러줍니다.
아래부분을 톡톡 치면서 내려줍니다.

잘 내려가지 않을 때는 B-5배지를 부어줍니다.

체에 걸러진 용액을 40ml씩 시험관에 넣고 원심분리기에 넣고

1,000 rpm으로 3분간 원심 분리하여 침전물을 남기고

위의 용액을 따라 버린 후 B-5배지를 넣어 다시 원심분리 합니다.

(3회 반복) 꼭 클린벤치 안에서!!

 

<주의 사항>
1) 원심 분리 시, 양 쪽 방향의 용액의 무게가 일치해야 합니다.

→ 저울을 이용해 무게를 일치 시킨 후, 각각의 용액을 서로 반대 방향의 양 쪽으로 넣어 원심분리 합니다.
2) 원심분리 후, 상층액을 버리는 과정에서 침전물이 따라 제거 되지 않도록 주의합니다. 

세척이 끝난 후 침전물에 NLN배지를 부어주고 차콜2ml를 피펫으로 추가해 줍니다.
피펫 에이드를 이용하여 60X15mm 페트리 디쉬에 2.5ml 식 담아줍니다.

페트리디쉬에 분주를 하고 클린벤치에서 파라필름을 붙여줍니다.

 

배양실에 준비한 챔버에 넣기 전에 신문지로

페트리디쉬 10개를 감아주어 빛이 들어가지 않게 해줍니다.

배양실에 준비한 윗칸의 조건 32℃ 3일동안 암배양을 하고
아랫칸 조건 25℃ 5일동안 암배양을 해준 다음
실험실에 위치한 쉐이킹 챔버에

28℃, 100rpm을 유지시키고 현탁배양 합니다.

12월 13일 암배양한 딸기 소포자를 뜯어 보았습니다.

가까이 보면 침전물이였던 차콜 알갱이가 보이는걸 확인할 수 있습니다.

암배양한 딸기 소포자 배양결과

아무결과가 없다는것을 확인 할 수 있습니다.
결과확인 관련 자료는 검색하여 확인부탁드립니다.

(시간을 두고 사진을 찍지 못한점 양해부탁드립니다.)

 

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